雷帕霉素通过上调TGF-β/smad信号通路减轻小鼠的实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的观察雷帕霉素对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠的治疗作用，并研究相关机制。方法建立C57BL/6小鼠 EAE模型，免疫成功后将小鼠分为试验对照组，雷帕霉素小剂量组（0.3 mg/kg/d）和雷帕霉素大剂量组（1 mg/kg/d）。应用Knoz 评分观察小鼠的临床评分，免疫组化法观察IL-17浸润情况，流式细胞仪观察外周Treg细胞的分化情况，ElISA法观察小鼠细胞 因子的变化情况，Western blot法观察p-smad2和p-smad3表达情况。结果大剂量雷帕霉素可以明显改善EAE小鼠的神经功能 缺损评分，在发病初期，高峰期及缓解期大剂量雷帕霉素组评分分别为（0.14±0.38），（0.43±1.13）和（0.14±0.37），而实验对照组 分别为（1.14±0.69），（2.14±1.06）和（2.2±0.75）；大剂量雷帕霉素组中可IL-17炎性细胞在在中枢神经系统的浸润为（43±1.83）， 而实验对照组为（153.5±7.02）；大剂量雷帕霉素可以抑制IL-12，IFN-γ，IL-17和IL-23炎性细胞因子同时诱导IL-10和TGF-β抗 炎性细胞因子；大剂量雷帕霉素组外周Treg 细胞为（10.17±0.68），较实验对照组（3.52±0.32）明显增多（P<0.05）；雷帕霉素和 TGF-β具有协同免疫抑制作用，体外实验发现雷帕霉素和TGF-β共同作用淋巴细胞后Treg细胞为（13.66±1.89），较单用雷帕霉 素（6.23±0.80）或单用TGF-β（4.87±0.85）均明显增多（P<0.05）；雷帕霉素可以上调p-smad2 和p-smad3 的表达，并呈剂量依赖 关系。结论雷帕霉素通过上调p-smad2 和p-smad3表达来促进Treg细胞分化，进而改善EAE的神经功能缺损评分。