17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Ca2+通道的作用

目的：观察17β-雌二醇（17β-E2）对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）成骨分化过程中钙离子（Ca²⁺）通道的影响，阐明17β-E2对MSCs促成骨分化的作用机制。方法：采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离出MSCs，连续传代3次，进行成骨细胞的诱导分化。将MSCs分为对照组单纯成骨细胞培养基（OBM）培养]和不同剂量17β-E2组（在OBM中分别添加0.1、1.0、10.0和100.0 pmol·L^-1 17β-E2）。成骨诱导14 d，各组细胞经Fluo-3/AM染色后，利用激光扫描共聚焦显微镜测定平均荧光强度（MFI），以MFI代表Ca²⁺水平。应用全细胞膜片钳技术记录不同条件下的全细胞Ca²⁺电流。结果：采用密度梯度离心法和贴壁筛选法成功分离MSCs。MSCs细胞呈成纤维细胞样，核呈椭圆形，细胞核内可见核仁。传代培养的MSCs生长旺盛，保持原代细胞的形态特征。随着17β-E2浓度的增加，各组细胞的Ca²⁺水平也逐渐增强，以100.0 pmol·L^-1 17β-E2组最为明显。与对照组比较，10.0和100.0 pmol·L^-1 17β-E2组的MSCs成骨分化过程中Ca²⁺水平和Ca²⁺电流峰值明显升高（P<0.05或P<0.01），0.1和1.0 pmol·L^-1 17β-E2组Ca²⁺水平和Ca²⁺电流峰值差异无统计学意义（P>0.05）。结论：密度梯度离心法和贴壁筛选法分离所得细胞为大鼠MSCs。17β-E2通过增强MSCs Ca²⁺通道的开放，增强Ca²⁺内向电流发挥促进成骨形成作用，并呈剂量依赖性。