| 铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 朱佑明,罗永艾,李文桂.铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF的构建及其表达[J].中国病原生物学杂志,2011(6). |
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| 作者姓名： | 朱佑明 罗永艾 李文桂 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第一医院呼吸内科;重庆市第一人民医院;重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所; |
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| 摘 要： | 目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增OprF抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016 bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切和测序鉴定证实OprF基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析表达产物分子质量单位约为61 ku,与预期结果一致,表达的蛋白质占菌体总蛋白的16%;Western blot鉴定重组蛋白能被Pa外膜粗抗原免疫小鼠血清识别。结论成功构建了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,该质粒在E.coliBL21(DE3)中高效融合表达,表达的融合蛋白具有抗原特异性。
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| 关 键 词： | 铜绿假单胞菌 OprF 大肠埃希菌 表达 |
Construction and expression of the recombinant plasmid pGEX-OprF of Pseudomonas aeruginosa |
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| ZHU You-ming,LUO Yong-ai,LI Wen-gui.Construction and expression of the recombinant plasmid pGEX-OprF of Pseudomonas aeruginosa[J].Journal of Pathogen Biology,2011(6). |
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| Authors: | ZHU You-ming LUO Yong-ai LI Wen-gui |
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| Institution: | ZHU You-ming1,2,LUO Yong-ai1,LI Wen-gui3(1.Department of Respiratory Medicine,the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China,2.Chongqing First People's Hospital,Chongqing 400022,3.Institute of Infectious and Parasitic Disease,the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pseudomonas aeruginosa OprF Escherichia coli expression |
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