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| 噬菌体展示技术筛选诱导型NOS基因启动子DNA结合蛋白的研究 | |
| 引用本文： | 郭风劲,成军,钟彦伟,刘妍,张黎颖,宋方洲. 噬菌体展示技术筛选诱导型NOS基因启动子DNA结合蛋白的研究[J]. 解放军医学杂志, 2005, 30(4): 290-292 |
| 作者姓名： | 郭风劲 成军 钟彦伟 刘妍 张黎颖 宋方洲 |
| 作者单位： | 1. 100011,北京,北京地坛医院传染病研究所;重庆医科大学生物学教研室 2. 100011,北京,北京地坛医院传染病研究所 3. 解放军第302医院传染病研究所 4. 100011,北京,北京地坛医院分子生物学教研室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号30371288)，北京市自然科学基金(编号5042024)，国家人事部第35批博士后科学基金(编号2004035045)资助课题 |
| 摘 要： | 目的筛选诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子DNA结合蛋白。探索iNOS基因的表达调控机制。方法应用生物信息学方法确定iNOS基因启动子序列，以PCR扩增iNOS基因启动子DNA片段，构建真核报告载体pcAT3-iNOSp，并转染HepG2细胞系，用ELISA法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性以明确所得到的DNA片段具有启动子活性；以iNOS基因启动子片段作为固相筛选分子，对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附一洗脱一扩增”富集过程，噬斑裂解液PCR扩增后，进行【)NA序列分析和蛋白质同源性生物信息学搜索。结果pCAT3-iNOSp瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的4．2倍，说明所得到的DNA片段具有启动子活性；噬菌体经富集后，筛选出12个阳性克隆，成功获得了iNOS基因启动子的DNA结合蛋白编码序列。结论所构建的iNOS基因启动子具有顺式激活下游基因表达的作用；筛选得到的iNOS启动子DNA结合蛋白对于研究iNOS基因的转录调节机制具有重要意义。 |
| 关 键 词： | 噬菌体展示技术 诱导型一氧化氮合酶启动子DNA结合蛋白质类 |
| 修稿时间： | 2004-12-01 |
Screening of promoter DNA-binding protein of iNOS gene by phage display technique from human liver cDNA library |
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| Guo Fengjin,Cheng Jun,Zhong Yanwei et al. Screening of promoter DNA-binding protein of iNOS gene by phage display technique from human liver cDNA library[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2005, 30(4): 290-292 | |
| Authors: | Guo Fengjin Cheng Jun Zhong Yanwei et al |
| Affiliation: | Guo Fengjin,Cheng Jun,Zhong Yanwei et al. Institute of Infectious Diseases,Beijing Ditan Hospital,Beijing 100011,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | phage display inducible nitric oxide synthase gene promoter DNA-binding proteins |
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