重组金黄色葡萄球菌肠毒素A突变体D227A蛋白的表达、纯化和鉴定

建立从金黄色葡萄球菌肠毒素A突变体D227A原核表达系统pET32a-SEAD227A-E.coliBL21DE3中,表达、纯化和鉴定重组金黄色葡萄球菌肠毒素A突变体D227A(rSEA-D227A)蛋白的方法。采用不同浓度的IPTG(0.1、0.5和1.0mmol.L-1)诱导原核表达系统表达rSEA-D227A,10%SDS-PAGE检测表达产量,Ni-NTA亲和层析法纯化rSEA-D227A,采用HPLC检测其纯度,Western-blotting进行免疫学鉴定。从已构建的金黄色葡萄球菌肠毒素A突变体D227A原核表达系统中成功表达和纯化了rSEA-D227A蛋白,产量约占细菌总蛋白的38.2%,纯度为88.7%。为后续进一步研究该蛋白的生物活性奠定基础。