丙型肝炎病毒HCV E1区基因的真核表达载体构建及序列分析

目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性.方法:经常规RT-PCR法从HCV RNA阳性病人的血清中扩增出HCV E1区的基因片段,经EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体P cDNA3中,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析.结果:RT-PCR扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3连接,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ酶切后产生了预期大小的144bp的片段 .测序后其核苷酸序列与已经报道的HCV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为72.8%、93.25% 、61.96%和56.44%;其推定的氨基酸序列的同源性分别为77.3%、95.7%、54.6%和51.35%;与已经报道的中国株的同源性为95.06%和93.25%;属HCV Ⅱ型; 经计算机辅助分析表明该片段内含有4个可能的糖基化位点,1个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有2个和1个抗原决定簇, 而每一个抗原决定簇内均含有1个糖基化位点,该片段内还含有2个T细胞识别位点.结论:本实验克隆的HCV E1基因属Ⅱ型,为我国流行的基因型,其基因的一级结构具备进行有关HCV核酸免疫的研究条件,其真核表达载体的构建,为进一步研究HCV E1基因的功能及HCV基因免疫的研究创造了条件.

Construction of mammalian cell expression vector of HCV E1 gene and analysis of its sequence