弓形虫棒状体基部蛋白38(ROP38)通过Toll样受体4(TLR4)诱导小鼠树突状细胞成熟

目的体外分析Toll样受体4(TLR4)诱导感染弓形虫棒状体基部蛋白38(ROP38)对小鼠树突状细胞(DC)成熟的影响。方法以异硫氰酸胍方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,采用PCR扩增ROP38,将ROP38连接至原核表达载体构建重组质粒pG EX-4T-ROP38;利用ProtS cale在线软件分析ROP38蛋白的亲水性和疏水性,利用DNAStar8.0分析ROP38蛋白的抗原表位;将重组质粒pG EX-4T-ROP38转化E.coli Rosetta感受态细胞,挑取阳性单菌落用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒表达,Western blot法检测ROP38蛋白水平。利用0.28 mg重组ROP38蛋白刺激小鼠骨髓来源DC,同时采用TLR4抗体封闭和空白处理为对照组。采用流式细胞术分析CD11c表达水平,运用SPSS23.0软件进行单因素方差分析。结果成功扩增弓形虫ROP38基因,其大小为516 bp,测序结果显示所获基因与GenB ank中已报道的序列(XM_002366710.2)同源性高达99%;ROP38基因序列生物信息学分析表明,ROP38蛋白含有5个α螺旋,5个β折叠,5个亲水性区域和8个可预测的抗原表位;重组质粒pG EX-4T-ROP38经IPTG诱导后,表达蛋白质的相对分子质量(Mr)为45 000,主要以包涵体形式存在。ROP38抗原刺激小鼠源DC后,其CD11c+表达水平明显高于TLR4抗体封闭组和空白对照组。结论 TLR4可诱导ROP38刺激小鼠DC的成熟。