小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 周湧超,徐志刚,杨澜,陈新宇,段志良,文金生.小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2018(5). |
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作者姓名: | 周湧超 徐志刚 杨澜 陈新宇 段志良 文金生 |
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作者单位: | 温州医科大学基础医学院虫媒病毒研究所;温州医科大学附属第二医院检验科 |
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摘 要: | 目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的m Ab的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测m Ab的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备m Ab识别EV71的能力。结果成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠m Ab均可识别EV71。结论成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的m Ab。
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