| EGFP-Cre重组酶真核表达重组质粒的构建及表达 |
| |
| 引用本文： | 李丽,陈凌,柯丹如,刘志春,江一平.EGFP-Cre重组酶真核表达重组质粒的构建及表达[J].福建医科大学学报,2007,41(2):101-104,108. |
| |
| 作者姓名： | 李丽 陈凌 柯丹如 刘志春 江一平 |
| |
| 作者单位： | 福建医科大学,细胞与发育工程研究中心,福州 350004 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建噬菌体P1 Cre重组酶真核表达重组质粒,检测其在体外的表达情况和生物学活性.方法 利用分子克隆技术,将cre编码序列克隆到真核表达质粒pIRES2-EGFP上,构建为重组质粒pCMV-Cre-EGFP.行菌液PCR、BamHⅠ酶切及测序鉴定,用FuGENE 6介导转染293T细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪观察分析Cre重组酶的表达和重组效应.结果 经菌液PCR、酶切及测序等鉴定分析,证实已将目的片段cre插入pIRES2-EGFP的多克隆位点上;建立Cre( )组(pCMV-Cre-EGFP和含Loxp-CMV-RFP-Loxp的pCSilencer质粒)和Cre(-)组(pIRES2-EGFP和pCSilencer),转染293T细胞,48 h后荧光显微镜下可见2组均表达绿色荧光和红色荧光,Cre( )组的红色荧光少于Cre(-)组;流式细胞仪检测荧光蛋白表达率,统计学分析显示2组细胞的红色荧光蛋白表达率存在显著性差异(P＜0.01).结论 成功构建噬菌体P1Cre重组酶表达重组质粒,并能在体外表达具有活性的Cre重组酶.
|
| 关 键 词： | 基因 细菌噬菌体P1 发光蛋白质类 重组酶类 克隆 分子 |
| 文章编号： | 1672-4194（2007）02-0101-04 |
| 修稿时间： | 2007-01-302007-03-10 |
Construction of EGFP-Cre Recombinase into Eukaryotic Recombinant Plasmid |
| |
| Li Li,Chen Ling,Ke Danru,Liu Zhichun,Jiang Yiping.Construction of EGFP-Cre Recombinase into Eukaryotic Recombinant Plasmid[J].Journal of Fujian Medical University,2007,41(2):101-104,108. |
| |
| Authors: | Li Li Chen Ling Ke Danru Liu Zhichun Jiang Yiping |
| |
| Institution: | Center of Cell and Development Biology, Fujian Medical University, Fuzhou 350004, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | genes bacteriophage P1 luminescent proteins recombinases cloning molecular |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
