Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1共转染人退变椎间盘髓核细胞对细胞外基质代谢的影响

目的探讨骨形态发生蛋白腺病毒表达载体（Ad—BMP-2）和转化生长因子-β1腺病毒表达载体（Ad—TGF—β1）共转染人退变椎间盘髓核细胞后对aggrecan和Ⅱ型胶原合成的影响。方法人退变椎间盘髓核细胞体外分离培养至第2代。为检测转入目的基因后蛋白表达情况，将其分为空白对照组、目的基因组和共转染组，细胞分别转染Ad—BMP-2（50MOI）、Ad-TGF-β1（50 MOI）及共转染（各50 MOI），再用Western blot方法检测转染后细胞目的蛋白的表达；为探讨目的基因对细胞外基质代谢的影响，将研究对象分为空白对照组（A组）、Ad—BMP-2100 MOI（B组）、Ad-TGF—β1100 MOI（C组）、Ad-BMP-2和Ad-TGF—β1各50 MOI（D组），用ELISA法分别检测转染第3天和第6天细胞上清液中aggrecan和Ⅱ型胶原的蛋白表达量。RT-PCR检测第6天髓核细胞内Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA的表达水平。应用方差分析比较组间差异，以P〈0．05表示差异有统计学意义。结果在转染目的基因载体后，目的蛋白表达增加。在转染后第3天和第6天各转染组细胞培养基中aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量高于对照组（P〈0．01），与转染单个基因组相比，共转染组的aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量明显增加（P〈0．01）；并且在转染后第6天共转染组髓核细胞内aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA表达也明显增加（P〈0．01）。结论转染Ad-BMP-2、Ad-TGF-β1能促进aggrecan和Ⅱ型胶原合成，同时上调aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA的表达；共转染Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1对细胞外基质的mRNA和蛋白合成有协同作用。