多种蚊媒传染病病原体悬液芯片检测及分型方法的建立

目的建立同时检测登革病毒(DENV1~4型)、日本脑炎病毒(JEV)、西尼罗病毒(WNV)、黄热病毒(YFV)、基孔肯雅病毒(CHIKV)、间日疟原虫(Pv)、恶性疟原虫(Pf)、三日疟原虫(Pm)和卵形疟原虫(Po)等6种12型病原体的悬液芯片检测方法。方法依据国家生物技术信息中心(NCBI)公开数据库中上述病原体的基因序列信息,设计并合成相关引物及探针,建立多重聚合酶链反应体系(多重PCR),产物与核酸探针微球组杂交后于Bio Plex200检测荧光信号值。结果建立的悬液芯片筛查方法具有较高的特异性和敏感性,能对6种12型病原体进行特异的检测。敏感性试验结果表明,Pm、CHIKV、Pv、WNV、DENV-1检测敏感性约为9DNA拷贝(3×10-7ng);Po、Pf、JEV、DENV-2、DENV-3、DENV-4和YFV检测敏感性约为90DNA拷贝(3×10-6 ng)。结论本研究建立的多重PCR技术结合悬液芯片筛查方法能快速、敏感、特异地同时检测6种共12型蚊媒传染病病原体,为疾病诊断及媒介生物携带病原体快速筛查和鉴定提供了新的手段。