| 大鼠新基因PMP22CD的克隆以及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 杨世蕊,郁美香,雷陈,周游,刘庆梅,刘佳佳,王明华.大鼠新基因PMP22CD的克隆以及多克隆抗体的制备[J].南通医学院学报,2009,29(3):160-164. |
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| 作者姓名： | 杨世蕊 郁美香 雷陈 周游 刘庆梅 刘佳佳 王明华 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学基础医学与生物科学学院,苏州,215123
2. 江苏省张家港市第一人民医院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，苏州大学医学发展基金 |
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| 摘 要： | 目的:通过PCR克隆PMP22CD基因,构建原核表达载体PET-32a(+)/PMP22CD,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定基础.方法:通过PCR的方法克隆PMP22CD基因,选择抗原性较强的C-端,构建原核表达载体PET32a(+)/PMP22CD,在大肠杆菌BL21(DE3 Lysis)中诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白以包涵体的形式存在,应用电洗脱的方式获得重组蛋白,免疫新西兰大白兔,获得抗血清,通过琼脂糖双扩和Western Blot检测抗血清效价和特异性.结果:经测序鉴定成功克隆PMP22CD基因,并构建PET-32a(+)/PMP22CD重组质粒,表达融合蛋白,免疫新西兰大白兔,获得PMP22CD多克隆抗体.结论:得到了纯化的PET-32a(+)/PMP22CD融合蛋白,获得了效价高、特异性强的抗体.
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| 关 键 词： | PMP22CD 原核表达 多克隆抗体 聚合酶链反应 免疫抗原 |
Cloning PMP22CD gene and preparing polyclonal antibody |
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| YANG Shirui,YU Meixiang,LEI Chen,et al.Cloning PMP22CD gene and preparing polyclonal antibody[J].ACTA Academiae Medicinae Nantong,2009,29(3):160-164. |
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| Authors: | YANG Shirui YU Meixiang LEI Chen |
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| Institution: | 1The School of Pre-clinical Medicine and Biological Science;Soochow Uni-versity;Suzhou 215123;2 The First People's Hospital of Zhangjiagang City |
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| Abstract: | Objective:Cloning PMP22CD gene by PCR,constructing expression vector PET-32a(+)/PMP22CD,expressing and purifying corresponding protein,to obtain its polyclonal antibody and provide reliable tools for the future research.Methods:The ORF fragment of PMP22CD was amplified by PCR and sequenced.Part of ORF which included more strong anti-genicity was chosen and cloned into PET-32a(+) prokaryotic expressing vector to form PET-32a(+) /PMP22CD.PET-32a(+)/PMP22CD was expressed in E.coli BL21(DE3 lysis) inducing by I... |
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| Keywords: | PMP22CD |
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