正交设计法优化川木通RAPD-PCR体系研究

目的 确定川木通RAPD-PCR反应各因素的最佳水平,最终确定RAPD-PCR反应的最佳反应条件.方法 采用正交设计L_(16)(4~5)在4个水平上对川木通类植物进行RAPD-PCR进行试验.两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析.结果 最终确定RAPD-PCR反应的最佳反应条件为:20 μl体系,其中含1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl_2,0.15 mmol/L dNTPs,1.0 U Taq酶,0.5 μmol/L 10-mer引物,50 ng模板DNA,最终确定退火温度36℃.同时发现Taq酶对反应体系影响最大.结论 建立了可靠的反应体系,为该类药材的分子鉴定奠定了基础.