| 小鼠乳酸脱氢酶C4在大肠杆菌中的可溶性表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 张朵,熊永忠,陈平,辛娜,兰风华.小鼠乳酸脱氢酶C4在大肠杆菌中的可溶性表达与鉴定[J].解放军医学杂志,2008,33(2):176-179. |
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| 作者姓名： | 张朵 熊永忠 陈平 辛娜 兰风华 |
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| 作者单位： | 南京军区福州总医院分子医学研究所,福州,350025 |
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| 基金项目： | 福建省重点科技攻关项目(2002Y032)，全军医药卫生“十五”基金项目(01MA032) |
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| 摘 要： | 目的构建小鼠精子特异性乳酸脱氢酶C4(mLDHC4)的原核表达载体并进行重组蛋白的纯化。方法提取小鼠睾丸组织总RNA,反转录合成cDNA。自行设计引物,PCR扩增mLDHC4的编码序列,产物经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-28a( )中,获得重组载体。将重组载体转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导mLDHC4表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和乳酸脱氢酶活性测定方法对重组mLDHC4进行鉴定,Ni -NTA亲和层析法纯化mLDHC4,并将其与pVAX1-mLDHC4(小鼠mLDHC4的真核表达载体)免疫小鼠的抗血清进行免疫印迹反应。结果重组载体经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后,可释放大小约1000bp的插入片段,序列分析表明,克隆的DNA片段与GenBank登录的mLDHC4编码序列完全一致,将此重组质粒命名为pET-28a( )-mLDHC4。在IPTG的诱导下,重组菌可表达大小约35kD的蛋白质,且其裂解液具有很高的乳酸脱氢酶活性,经亲和层析纯化后在聚丙烯酰胺凝肢中仅显示单一蛋白区带,与抗血清反应后在硝酸纤维素膜上形成特异性条带。结论小鼠mLDHC4的全长编码序列已被克隆至原核表达载体pET-28a( )质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,纯化后的蛋白特异性高、活性强。
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| 关 键 词： | 乳酸脱氢酶类 基因表达 |
| 收稿时间： | 2007-05-30 |
| 修稿时间： | 2007-11-30 |
Soluble expression and characterization of mouse lactate dehydrogenase-C4 in Escherichia coli |
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| Zhang Duo, Xiong Yongzhong, Chen Ping, et al.Soluble expression and characterization of mouse lactate dehydrogenase-C4 in Escherichia coli[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2008,33(2):176-179. |
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| Authors: | Zhang Duo Xiong Yongzhong Chen Ping |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lactate dehydrogenase5 gene expression |
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