| 蜂毒肽基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步鉴定 |
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| 引用本文： | 朱文赫,田立玲,孙妙囡,孙德军. 蜂毒肽基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步鉴定[J]. 中国生化药物杂志, 2010, 31(1) |
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| 作者姓名： | 朱文赫 田立玲 孙妙囡 孙德军 |
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| 作者单位： | 1. 吉林大学,再生医学科学研究所生物技术药物教研室,吉林,长春,130021
2. 吉林省辉发制药股份有限公司,吉林,辉南,135100 |
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| 基金项目： | 吉林省科技发展计划项目 |
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| 摘 要： | 目的通过pGEX-2T原核表达载体表达蜂毒肽。方法将人工合成整合了肠激酶作用位点的蜂毒肽基因,插入载体pGEX-2T,构建蜂毒肽与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-MEL。重组质粒转化E.coliBL21(DE3)诱导表达,超声破碎菌体,SDS-PAGE检测蛋白表达情况,取超声上清,通过GST亲和色谱系统纯化目的融合蛋白,酶切通过溶血实验检测其溶血活性。结果SDS-PAGE结果显示,表达了相对分子质量约为30 000的融合蛋白,目的融合蛋白量约占菌体总蛋白量的29.5%。经Western blot鉴定,表达的GST融合蛋白与GST抗体有强烈的交叉反应,说明成功表达了目的融合蛋白。取超声上清,亲和色谱纯化融合蛋白,纯度为95%。肠激酶切割得到了人工天然蜂毒肽,测定蜂毒肽回收率为80%。结论通过原核表达系统成功表达蜂毒肽,具有和天然蜂毒相同的溶血活性。
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| 关 键 词： | 蜂毒肽 大肠杆菌 表达 纯化 |
Expression,purification and preliminary identification of Melittin in E. coli |
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| ZHU Wen-he,TIAN Li-ling,Sun Miao-nan,SUN De-jun. Expression,purification and preliminary identification of Melittin in E. coli[J]. Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics, 2010, 31(1) |
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| Authors: | ZHU Wen-he TIAN Li-ling Sun Miao-nan SUN De-jun |
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| Affiliation: | ZHU Wen-he1,TIAN Li-ling2,Sun Miao-nan1,SUN De-jun1(1.Department of Biomedicine,Institute of Frontier Medical Sciences,Jilin University,Changchun 130021,China,2.Jilinsheng Huifa Pharmaceutical Co.Ltd.,Huinan 135100,China) |
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| Abstract: | Purpose Melittin was expressed in prokaryotic vector pGEX-2T for production.Methods Melittin gene synthesized with enterokinase digested sequence,the gene was cloned into vector pGEX-2T,and constructed a recombinant plasmid of pGEX-MEL.Then the recombinant vector was introduced into E.coli BL21(DE3)for expression.Fusion protein was purified by affinity chromatography.Hemolytic activity of Melittin was detected.Results Analysis result showed that the expression products accumulate in the cells to about 29... |
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| Keywords: | Melittin e. coli expression purification |
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