| 人CD4~+T淋巴细胞活化相关miRNA的筛选及其靶分子鉴定 |
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| 引用本文： | 薛茜,郭张燕,李伟,王涛,孟艳玲,杨安钢.人CD4~+T淋巴细胞活化相关miRNA的筛选及其靶分子鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(2). |
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| 作者姓名： | 薛茜 郭张燕 李伟 王涛 孟艳玲 杨安钢 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)资助项目，教育部"长江学者和创新团队发展计划"资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:筛选与CD4~+ T淋巴细胞活化相关的miRNA,确定其靶分子.方法:用抗CD3的单免隆抗体(mAb)和抗CD28的mAb诱导Jurkat细胞活化,利用miRNA芯片检测并筛选出活化前后表达丰度有显著变化的microRNA,用定量RT-PCR证实筛选出的miRNA在Jurkat细胞活化的差异表达.设计引物构建miRNA的表达载体.利用牛物信息学软件预测miRNA的靶分子,将靶分子mRNA的3'UTR克隆入pGL3Luciferase报告基因载体中.观察转染的miRNA对报告基因表达的影响.结果:流式细胞术(FCM)证实了抗CD3的mAb和抗CD28的mAb可以诱导Jurkat细胞的活化.经miRNA芯片检测表明,Jurkat细胞活化前后有5种miRNA表达水平明显下降,定量RT-PCR证实了miRNA芯片的结果.成功构建了部分预测靶分子的荧光素酶报告基因载体.双荧光素酶报告系统检测了miR-181c对靶分子的干扰作用.结论:miR181c与人CD4~+ T淋巴细胞的活化有着密切的关系,CD69可能足miR-181c的一个靶分子.
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| 关 键 词： | T淋巴细胞 活化 |
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