重组人转化生长因子β_1在大肠杆菌中的表达及其活性检测

目的运用基因重组的方法，对人转化生长因子β 1(TGF－β 1)进行基因克隆，并在大肠杆菌中表达。同时检测其生物活性。方法以 pBV220作为原核细胞表达载体，用限制性内切酶将 pBSksTGF－β 1中的 TGF－β 1cDNA片段定向重组到 pBV200的多克隆位点上，经酶切分析，筛选构建了原核细胞表达性质粒 pTGF－β 1。将该质粒分别转化至大肠杆菌中，建立 TGF－β 1原核表达体系 pTGF－β 1-DH5α和 pTGF－β 1-JM109,进行温度诱导表达。结果表达产物经 SDS-PAGE分析， Western- blot、 SDS、 PAGE光密度扫描检测证实，该体系可高效表达 TGF－β 1，其表达产物约占菌体可溶性蛋白的 23％。用 NRK细胞对表达产物进行活性检测证明，本研究生产的 TGF－β 1具有该蛋白的野生活性。结论 TGF－β 1原核表达体系的建立为 TGF－β 1的生产提供了高效的表达工程菌株，为进一步研究其分离纯化工艺提供了重要的实验模型。