SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测人c-myc基因方法的建立 |
| |
引用本文: | 孙秀静,朱圣韬,徐有青,张澍田.SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测人c-myc基因方法的建立[J].首都医学院学报,2009,30(6):821-826. |
| |
作者姓名: | 孙秀静 朱圣韬 徐有青 张澍田 |
| |
作者单位: | 孙秀静,徐有青,SUN Xiu-jing,XU You-qing(首都医科大学附属北京天坛医院消化内科);朱圣韬,张澍田,ZHU Sheng-tao,ZHANG Shu-tian(首都医科大学附属北京友谊医院消化内科) |
| |
基金项目: | 北京市自然科学基金,北京市教委科技发展计划面上项目 |
| |
摘 要: | 目的构建含有c-myc基因的重组质粒并以其为模板,建立以SYBR GreenⅠ染料为荧光指示剂的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测c-myc的标准曲线,为FQ-PCR准确检测c-myc奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人食管鳞癌组织的总mRNA中反转录扩增c-myc cDNA,将纯化的PCR产物与pGEM-T Easy载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,然后挑选阳性克隆重组质粒,分别用PCR扩增、限制性核酸内切酶EcoRⅠ酶切进行鉴定并测序分析。用紫外分光光度计测质粒浓度,计算拷贝数制备FQ-PCR浓度梯度标准品。最后对质粒标准品进行FQ-PCR检测。结果PCR扩增、酶切鉴定及测序分析均证实c-myc重组到pGEM-T Easy载体上。建立了人c-myc标准曲线,其对数与相应的Ct值(循环阈值)具有良好的相关性,相关系数r2=-0.99~-1,斜率为-3.1~-3.6。结论所构建的人c-myc质粒标准品应用SYBR GreenⅠ荧光染料技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏性和特异性高,准确可靠,此方法可作为FQ-PCR检测c-myc基因的标准方法。
|
关 键 词: | SYBR GreenⅠ染料 实时荧光定量 反转录聚合酶链反应 c-myc基因 |
收稿时间: | 2009-04-07 |
本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录! |
| 点击此处可从《首都医学院学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《首都医学院学报》下载免费的PDF全文 |
|