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| XTP3基因融合蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备 | |
| 引用本文： | 徐浩,赵龙凤,成军,刘秀财,王琦,李国力,洪源,兰孟东,孙成福.XTP3基因融合蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备[J].解放军医学杂志,2008,33(7). |
| 作者姓名： | 徐浩 赵龙凤 成军 刘秀财 王琦 李国力 洪源 兰孟东 孙成福 |
| 作者单位： | 1. 山西医科大学附属第一医院感染病科,太原,030001 2. 北京地坛医院传染病研究所 3. 北京地坛医院传染病研究所理科 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) , 京市科委重大科技项目 |
| 摘 要： | 目的构建稳定表达乙肝病毒XTP3蛋白的原核表达载体并在大肠埃希菌中诱导融合蛋白的表达,制备兔抗XTP3蛋白多克隆抗体并检测该抗体在乙肝肝癌、正常肝组织中的作用效果。方法PCR获得XTP3基因片段,插入至pET-32a( )中构建原核表达载体pET-32a( )-XTP3,测序正确后转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western blotting分析鉴定融合蛋白的表达。利用Ni 亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。免疫新西兰兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blotting及免疫组化验证。结果成功构建pET-32a( )-XTP3表达载体并在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的XTP3融合蛋白,目的蛋白分子量为52kD,SDS-PAGE分析表明为包涵体表达。经亲和树脂纯化后免疫新西兰兔,成功获得融合蛋白及兔抗XTP3多克隆抗体。ELISA检测证明多克隆抗体效价>1:128000。免疫组化证实本实验中XTP3多克隆抗体在肝癌组织中的表达呈明显的细胞膜阳性,特异性良好。结论成功表达、纯化了XTP3基因融合蛋白,获得高特异性、高效价兔抗XTP3多克隆抗体,为进一步研究XTP3蛋白的生物学特性奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 肝炎 乙型 慢性 原核表达 基因 XTP3 |
Expression and polyclonal antibody preparation of human XTP3 gene |
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| Xu Hao,Zhao Longfeng,Cheng Jun,et al..Expression and polyclonal antibody preparation of human XTP3 gene[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2008,33(7). | |
| Authors: | Xu Hao Zhao Longfeng Cheng Jun |
| Institution: | Xu Hao,Zhao Longfeng,Cheng Jun,et al. Department of Infectious Disease,First Affiliated Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | hepatitis B chronic prokaryotic expression genes XTP3 |
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