人源化抗肝癌scFv融合RC—RNase在大肠埃希菌中的表达及对人肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤作用

目的：在大肠埃希茼中可溶性表达新型重组人源化抗肝癌单链抗体融合RC-RNase(scFv-RC-RNase)，观察其对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用。方法：将原核表达质粒Tih-scF-RC-RNase以大肠埃希茼E．codiBL21(DE3)为宿主菌，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达．工程菌经超声碎菌、离心后，上清液用Ni-NTA Agarose亲合层析法进行纯化。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测纯化蛋白对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤作用。结果：IPTG诱导5h后，SDS-PAGE显示抗肝癌scFv-RC-RNase在大肠埃希茵E.coliBL21(DE3)中主要以可溶性的形式表达，表达量占茵体总蛋白量的lO．5％。MTT法提示，纯化后的表达产物对体外培养的人肝癌细胞SMMC一7721具有一定的杀伤作用，其半数致死量(LDs50)为0．007g／L。结论：抗肝癌scFv-RC-RNase融合蛋白有望成为一种具有一定临床应用潜力的抗肝癌导向治疗药物。