神经干细胞移植治疗脑缺血的实验模型

目的：建立一个方便、有效的动物实验模型以研究神经干细胞移植治疗脑缺血的可行性。方法：实验于2004—09／2005—10在第四军医大学全军神经外科研究所完成。健康家猫12只，随机分为缺血再灌注组（10只）和假手术组（2只），参照四血管阻塞法制作猫全脑缺血模型。先用显微手术的方法分离家猫双侧椎动脉并电凝，永久性闭塞双侧椎动脉。24h后再分离双侧颈总动脉，用动脉夹阻断血流。用含表皮生长因子的无血清培养基原代分离培养小鼠神经干细胞。将原代培养的小鼠神经干细胞移植到全脑缺血再灌注损伤模型的一侧大脑皮层中，假手术组猫大脑皮层注射同量的磷酸盐缓冲溶液；用免疫荧光技术检测移植1个月后的小鼠神经干细胞。结果：实验家猫12只，进入结果分析9只。（1）缺血再灌注组10只家猫经缺血再灌注损伤后死亡2只，1只夹闭血管后始终未出现静息脑电波，模型制作成功7只，成功率70％。假手术组家猫全部存活。缺血再灌注损伤后的家猫均出现不同程度的肢体瘫痪及平衡失调表现。饲养1周后，肢体瘫痪及平衡失调表现均逐渐有所改善。②原代培养细胞在无血清培养基中生长2—3d后，大部分细胞死亡，只有少数以单细胞形式悬浮生长。部分细胞分裂形成几个到几十个细胞的细胞团。到7—10d时可生长成有数十个到数百个细胞的细胞团，也呈悬浮生长。这些悬浮生长的细胞在含血清培养基中能够贴壁生长并部份分化成神经微丝抗原阳性的神经元及胶质纤维酸性蛋白抗原阳性的神经胶质细胞。（3）细胞移植后，家猫症状有所改善，但移植侧与对侧肢体瘫痪及平衡失调表现改善无明显差别。④免疫荧光方法检测小鼠神经干细胞移植到猫前脑后1个月仍有大量存活，部份细胞分化为神经元及神经胶质细胞，部份细胞向猫脑组织中迁移。迁移深度0．1—0．2mm。呈弥散性分布。沿针道侧壁贴附的细胞呈圆形，迁移到脑组织深部的细胞大多呈梭形。海马及对侧脑皮层等远隔部位未检测到阳性细胞存在。不同个体间未发现明显差异。⑤缺血再灌注组脑皮层及海马CA1区苏木精-伊红染色示典型的迟发性神经元坏死。结论：小鼠神经干细胞在猫全脑缺血模型中能够存活、迁移并分化；成功建立一个神经干细胞移植治疗脑缺血的实验模型。

Experimental model of brain ischemia treated with neural stem cells graft