| HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达 |
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| 引用本文： | 李存枚,潘卫,曹洁,王锦红,黄德圣,庞强,廖文婷,邓松华. HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达[J]. 安徽医科大学学报, 2009, 44(1) |
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| 作者姓名： | 李存枚 潘卫 曹洁 王锦红 黄德圣 庞强 廖文婷 邓松华 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学病理生理学教研室,合肥,230032;第二军医大学微生物学教研室,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，上海市基础研究重点项目，国家高技术研究发展计划(863计划)，安徽省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coli B121(DE3)中进行高效表达和纯化.方法 应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(AC)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定.结果 构建了pET32a-Tat(cn)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17 mg/nd,相对分子质量为31 ku.间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应.结论 成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1 Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1 Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论.
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| 关 键 词： | HIV-1/遗传学 大肠杆菌/遗传学 基因产物 tat 基因表达 |
Effective expression of HIV-1 HXB2 subtype Tat protein shifted the cysteine-rich region to N terminal in E. coli |
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