五种常用轮状病毒检测方法的评价及应用策略

目的比较胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量-反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gelelectrophoresis,PAGE)5种常用的轮状病毒检测方法的准确性。方法取A组轮状病毒阳性标本,经1×101~1×10810倍系列稀释,采用上述5种方法平行检测,比较检测限;选择分别含有以下9种病原体且轮状病毒证实为阴性的粪便标本作为阴性对照:脊髓灰质炎病毒疫苗株Ⅰ~Ⅲ型、肠道病毒EV71、柯萨奇病毒A16、ECHO病毒6、诺如病毒Ⅰ型、诺如病毒Ⅱ型和星状病毒,采用上述5种方法平行检测,比较特异性;采用上述方法,分别对184例婴幼儿腹泻粪便标本进行检测,以PAGE检测结果作为参考标准,比较其余4种方法的灵敏度和特异性。结果上述5种方法检测A组轮状病毒的检测限相差5个数量级,分别为:real-time RT-PCR法10-6稀释度,胶体金法10-3稀释度,ELISA和PAGE方法均为10-2稀释度,RT-PCR法10-1稀释度;5种方法对9种对照病原体均无交叉反应;以PAGE方法检测结果作为标准,real-time RT-PCR、ELISA、胶体金和RT-PCR灵敏度分别为95.45%、96.97%、93.94%和62.12%,特异性分别为82.2%、86.44%、82.20%和94.07%。结论 PAGE作为检测轮状病毒的经典方法,具有高特异性,可用于确认实验;real-time RT-PCR方法检测A组轮状病毒的灵敏度优于其他4种方法,可用于轮状病毒的高通量检测;ELISA和胶体金方法具有良好的灵敏度与特异性,且胶体金方法成本低,可用于初筛检测;行业标准推荐的RT-PCR方法特异性较高,但灵敏度较低,有待改进。

Evaluation on performance of five routine rotavirus detection assays and application strategies