ATF6调控生殖相关基因HSPA1L表达的分子机制

目的 探究内质网应激活化转录因子6(ATF6)对生殖相关基因热休克蛋白A1样蛋白(HSPA1L)表达的影响并初步阐明其调控分子机制。方法 在人胚肾细胞系HEK-293T中转染ATF6过表达质粒，RT-qPCR和Western blot验证过表达效率；利用雄性ATF6敲除小鼠睾丸组织转录物组测序信息，筛选ATF6下游5个生殖相关基因；双荧光素酶报告基因实验选择启动子活性较高的下游基因并检测过表达ATF6对其启动子活性的影响；通过gene-regulation预测ATF6和下游基因启动子可能的结合位点；RT-qPCR和Western blot检测在HEK-293T细胞中过表达ATF6对于下游基因表达的影响；利用凝胶迁移实验(EMSA)确定ATF6与下游基因启动子是否结合。结果 转染后HEK-293T细胞中ATF6的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平明显升高。转录物组测序及双荧光素酶报告基因实验筛选出ATF6下游的生殖相关基因HSPA1L。ATF6能够促进HSPA1L的截短启动子活性(P<0.001)。过表达ATF6后，HSPA1L的表达量明显升高(P...