过表达表皮生长因子受体对人类黑素瘤脑转移瘤细胞系H1生长和转移的影响

目的 探索表皮生长因子受体（EGFR）在黑素瘤生长和转移过程中的作用。 方法 选用本实验室已建立的人黑素瘤脑转移瘤细胞系（H1），通过慢病毒载体稳定转染野生型EGFR（H1EGFRwt），使其呈EGFR过表达状态，对照组转染绿色荧光蛋白（H1GFP）后分选纯化。采用细胞划痕实验对实验组H1EGFRwt细胞和对照组H1GFP细胞的迁移能力进行分析，结果以划痕面积愈合率表示。采用集落形成实验观察EGFR对两组细胞独立生存能力和集落形成能力的影响，通过刃天青还原试验评估集落形成结果，结果以两组细胞活细胞数及其代谢活性评分表示。Western印迹分析EGFR激活的信号通路。采用SPSS 20.0软件进行重复测量的方差分析比较两组细胞划痕面积愈合率的差异，采用配对样本t检验比较两组细胞不同预处理的代谢评分差异。 结果 流式细胞仪检测显示，H1细胞EGFR和GFP转染成功，分选后得到了纯化H1EGFRwt和H1GFP细胞。细胞划痕实验显示，实验组H1EGFRwt在给予表皮生长因子（EGF）刺激的不同时间点（6、18、24、48 h），划痕面积愈合率分别为0.145 ± 0.066、0.479 ± 0.096、0.571 ± 0.198、0.672 ± 0.199，对照组H1GFP在相同条件下分别为0.051 ± 0.036、0.254 ± 0.038、0.303 ± 0.077和0.498 ± 0.111， H1EGFRwt细胞的愈合程度均高于H1GFP细胞，两组比较，F = 68.49，df = 5，P < 0.05。集落形成实验证实，H1EGFRwt细胞的代谢评分（92 225.2 ± 6 632.1）高于H1GFP细胞（62 935.7 ± 8 159.2），两组比较，t = 2.26，df = 9，P < 0.01。Western印迹结果显示，H1EGFRwt细胞可在EGF的刺激下激活下游信号磷酸化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C-γ（pPLCγ）、磷酸化信号转导和转录活化因子5（pSTAT 5）、磷酸化信号转导和转录活化因子3（pSTAT3），而对照组未能激活。此外，H1EGFRwt细胞可在EGF刺激下使磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶（pAKT）和磷酸化有丝裂原活化蛋白激酶（pMAPK）表达明显高于对照组。 结论 EGFR在黑素瘤H1细胞的转移机制中发挥重要作用，并有可能成为黑素瘤转移治疗中的靶向目标。

Effect of overexpression of epidermal growth factor receptor on the growth and migration of a brain-metastatic H1 human melanoma cell line