| 人TNFα真核表达载体的构建及其在人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM中的稳定表达 |
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| 引用本文： | 丁磊,吴挺,陈孝平,张志伟,曹斌,靖凯,赵旭.人TNFα真核表达载体的构建及其在人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM中的稳定表达[J].中华肿瘤防治杂志,2007,14(4):261-264. |
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| 作者姓名： | 丁磊 吴挺 陈孝平 张志伟 曹斌 靖凯 赵旭 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心,湖北,武汉,430030
2. 华北石油总医院普外科,河北,任丘,062552 |
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| 基金项目： | 卫生部临床学科重点项目 |
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| 摘 要： | 目的：构建可在真核细胞内表达人肿瘤坏死因子alpha （hTNF-α） 基因的真核表达载体,建立稳定表达hTNF-α基因的细胞模型.方法： 应用RT-PCR 的方法从分离的正常人外周血单核细胞（LPS刺激）中,扩增出hTNF-αcDNA ,连接至载体pMD18-T vector中,经酶切鉴定与序列测定证实;以亚克隆法构建于真核表达载体pBK-CMV的相应酶切位点, 转化至大肠埃希菌DH5α,最后将表达的pBK-hTNFα重组蛋白行SDS-PAGE电泳,并作考马斯亮蓝染色分析,Western blot鉴定;经脂质体Lipofectamine2000转染HepG2/ADM细胞后,经G418筛选,通过ELISA、RT-PCR方法检测其在体外转染肝癌耐药细胞HepG2/ADM后hTNFα基因和蛋白的表达.结果：自正常人外周血单核细胞中克隆的hTNF-αcDNA 成功连接到pMD18-T vector,用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切、经序列测定证实,与Genbank的序列完全一致;pBK-hTNFα的克隆表达重组蛋白经Western blot证实此蛋白为hTNFα.克隆基因正确插入载体pBK-CMV中.pBK-hTNFα经脂质体介导转染肝癌耐药细胞后, ELISA、RT-PCR方法检测到其在转染细胞中稳定表达.结论：通过DNA重组技术成功地构建了可在体外稳定表达hTNF-αcDNA 全长的真核表达载体pBK-hTNFα.
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| 关 键 词： | 肝肿瘤 肿瘤坏死因子α/遗传学 DNA 重组 基因表达 遗传载体 聚合酶链反应 |
| 文章编号： | 1673-5269（2007）04-0261-04 |
| 收稿时间： | 2006-05-06 |
| 修稿时间： | 2006-08-10 |
Construction of a recombinant eukaryotic vector expressing human tumor necrosis factor alpha and expressing stably in cell line HepG2/ADM |
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| DING Lei,WU Ting,CHEN Xiao-ping,ZHANG Zhi-wei,CAO Bin,JING Kai,ZHAO Xu.Construction of a recombinant eukaryotic vector expressing human tumor necrosis factor alpha and expressing stably in cell line HepG2/ADM[J].Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment,2007,14(4):261-264. |
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| Authors: | DING Lei WU Ting CHEN Xiao-ping ZHANG Zhi-wei CAO Bin JING Kai ZHAO Xu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | liver neoplasms tumor necrosis factor alpha/genetics DNA recombinant gene expression geneticvectort polymerase chain reaction |
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