下调miR-199a-5p抑制脂多糖诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞系AECⅡ凋亡

目的探讨miR-199a-5p在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清中的表达及其对脂多糖(LPS)诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞系(AECⅡ)凋亡的影响和可能机制。方法选取2017年4月至2018年12月于湖南中医药大学第一附属医院就诊的45例COPD患者和同时期45名健康体检者。体外培养AECⅡ,分为对照组(control)、LPS组(100 ng/mL LPS)、anti-miR-199a-5p+LPS组(转染miR-199a-5p抑制剂后用100 ng/mL LPS培养)、anti-miR-NC+LPS组(转染miR-199a-5p抑制剂阴性对照序列)、anti-miR-199a-5p+si-FZD4+LPS组(同时转染miR-199a-5p抑制剂与FZD4小干扰RNA)和anti-miR-199a-5p+si-NC+LPS组(同时转染miR-199a-5p抑制剂与FZD4乱序无意义阴性序列)。RT-qPCR检测血清和细胞中miR-199a-5p和FZD4 mRNA表达,流式细胞计量术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中FZD4、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-5p与FZD4靶向关系。结果与对照组比较,COPD患者血清中miR-199a-5p表达水平显著升高(P0.05),而FZD4 mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与对照组比较,LPS组细胞中miR-199a-5p表达水平显著升高(P0.05),而FZD4 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。与anti-miR-NC+LPS组比较,anti-miR-199a-5p+LPS组细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。miR-199a-5p靶向调控FZD4,与anti-miR-199a-5p+si-NC+LPS组比较,anti-miR-199a-5p+si-FZD4+LPS组细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 miR-199a-5p在COPD患者血清及LPS诱导的AECⅡ中表达升高,下调miR-199a-5p表达可能通过上调FZD4表达抑制LPS诱导的AECⅡ凋亡。