| 利用PCR产物快速构建兔HPRT 基因无启动子打靶载体 |
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| 引用本文： | 郭毅,张传山,谷瑞环,姚刚,陈学进. 利用PCR产物快速构建兔HPRT 基因无启动子打靶载体[J]. 实验动物与比较医学, 2009, 29(2). DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2009.02.004 |
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| 作者姓名： | 郭毅 张传山 谷瑞环 姚刚 陈学进 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海,200025
2. 新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052 |
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| 基金项目： | 上海市科技兴农重点攻关项目，上海市科技兴农重点攻关项目，上海市科委基础研究重点项目 |
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| 摘 要： | 目的 探讨构建兔HPRT基因打靶载体的方法,为下一步获得兔 HPRT基因敲除动物模型和转基因兔奠定基础.方法 首先在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,从此克隆上将一段12.5 kb无启动子的HPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上,产生pKS-rHPRT质粒.然后基于pKS-rHPRT和pIGCN21质粒,通过PCR的方法获得两个不同的带有50 bp HPRT 基因同源序列的IRES-eGFPCre-Frt/Neo/Frt同源重组片段,最终构建 HPRT 基因敲除打靶载体和无启动子基因敲入型打靶载体.结果 PCR、限制性内切酶及DNA序列测定,表明载体构建成功.结论 成功快速地构建了HPRT 基因敲除打靶载体和无启动子基因敲入型打靶载体.同时对利用同源重组技术敲除或插入DNA片段的效率进行了研究.
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| 关 键 词： | Red重组 PCR技术 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因(HPRT) 打靶载体 |
The Rapid Construction of Rabbit HPRT Promoterless Gene-targeting Vector with PCR Product |
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| GUO Yi,ZHANG Chuan-shan,GU Rui-huan,YAO Gang,CHEN Xue-jin. The Rapid Construction of Rabbit HPRT Promoterless Gene-targeting Vector with PCR Product[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2009, 29(2). DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2009.02.004 |
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| Authors: | GUO Yi ZHANG Chuan-shan GU Rui-huan YAO Gang CHEN Xue-jin |
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