重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验 |
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引用本文: | 朱全胜,丘钜世,赵国强,王娅兰,梁惠珍,张萌.重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验[J].中山大学学报(医学科学版),1998(3). |
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作者姓名: | 朱全胜 丘钜世 赵国强 王娅兰 梁惠珍 张萌 |
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作者单位: | 中山医科大学病理学教研室,重庆医科大学病理学教研室 |
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摘 要: | 目的:将外源性野生型p53基因导入人骨肉瘤细胞株,研究野生型p53蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法:用DNA转染技术将7重组野生型p53基因PM47质粒导入人骨肉瘤细胞株HOS8603中,用PCR技术监测外源性p53基因在瘤细胞中存在的稳定性;用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中p53的表达情况;用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点;用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结果:成功地将重组野性型p53基因PM47质粒导入人骨肉瘤细胞株HOS8603中,在gpt选择培养基中培养两周后,分离生长出阳性细胞克隆;经PCR证实外源性p53基因在瘤细胞内稳定存在并可随瘤细胞分裂而传给子代;当向培养液中加入1μmol/L地塞松(Dex)后,8h即可用免疫组化方法检测到p53蛋白的表达并可观察到瘤细胞出现凋亡的一系列形态学改变,转染后的瘤细胞凋亡率高达90%。结论:当人骨肉瘤细胞株中重组野生型p53基因诱导过表达时,瘤细胞呈现凋亡,本实验为骨肉瘤的基因治疗提供了理论依据。
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关 键 词: | 蛋白质p53 骨肉瘤 基因转移 凋亡 |
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