酵母双杂交筛选与转录因子ZNF580相互作用的蛋白 |
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引用本文: | 罗玉玉,杨蓉,孔麟麟,任党丽,张文成.酵母双杂交筛选与转录因子ZNF580相互作用的蛋白[J].中国病理生理杂志,2012,28(6):1120-1123. |
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作者姓名: | 罗玉玉 杨蓉 孔麟麟 任党丽 张文成 |
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作者单位: | 1. 中国人民武装警察部队后勤学院生理学与病理生理学教研室, 天津 300162;
2. 武警沈阳指挥学院门诊部, 辽宁 沈阳 110034 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(No.81170106);天津市自然科学基金资助项目(No.10JCYBJC26500);武警后勤学院资助项目(No.WYM2010-5) |
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摘 要: | 目的: 寻找可能与锌指转录因子ZNF580存在相互作用的蛋白。方法: 以ZNF580基因开放阅读框作为模版,PCR扩增后连接入酵母表达质粒pGB。诱饵质粒pGB-ZNF580经测序验证后转化酵母菌株Y190,人胎脑cDNA文库亦转化到能稳定表达诱饵蛋白的Y190酵母菌株中,并铺到含有营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-His/-Leu)的培养皿上进行初步筛选。所得阳性克隆再进行β-半乳糖苷酶克隆转移滤纸实验进一步去除假阳性。随机挑取部分阳性克隆,逐一转化入含有诱饵质粒的Y190 酵母菌进行一对一验证。分离阳性克隆质粒测序,并应用生物信息学方法分析阳性克隆cDNA编码的蛋白。结果: 确定了14种与ZNF580可能存在相互作用的蛋白。结论: 初步探讨了ZNF580的功能及其可能参与的信号转导通路,为进一步研究转录因子ZNF580参与动脉粥样硬化的机制奠定了实验基础。
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关 键 词: | ZNF580 转录因子 酵母双杂交 蛋白相互作用 |
收稿时间: | 2011-11-28 |
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