miR-7靶向沉默EGFR抑制大鼠星形胶质细胞活化 |
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引用本文: | 钱红,胡柯,刘理静,谢明,武衡,李文军,武斌,聂萌.miR-7靶向沉默EGFR抑制大鼠星形胶质细胞活化[J].中国药理学通报,2018(3):376-382. |
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作者姓名: | 钱红 胡柯 刘理静 谢明 武衡 李文军 武斌 聂萌 |
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作者单位: | 1.湖南医药学院医学院;2.南华大学附属第一医院神经内科;3.怀化市第一人民医院老年科;4.怀化市第一人民医院神经内科 |
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基金项目: | 怀化市科技计划资助项目(No 2015F3102);湖南省教育厅资助科研项目(No 14C0906) |
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摘 要: | 目的探讨微小RNA-7(miR-7)对星形胶质细胞活化的影响及分子机制。方法培养大鼠皮层星形胶质细胞,分别用培养液(对照组)、睫状神经营养因子(CNTF,用于活化星形胶质细胞)、miR-7 mimic+CNTF、miR-7 mimic control+CNTF、miR-7 inhibitor+CNTF及miR-7 inhibitor control+CNTF处理,采用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达,通过Western blot检测GFAP、EGFR、信号传导蛋白和转录激活物3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。构建野生型pGL3-EGFR及突变型p GL3-EGFR-m重组质粒,分别与miR-7 mimic共转染HEK293T细胞,检测荧光素酶报告基因活性。此外,以EGFR si RNA或STAT3抑制剂S31-201处理星形胶质细胞,再与miR-7 inhibitor和CNTF孵育,然后用q RT-PCR、Western blot检测GFAP m RNA与蛋白表达。结果 CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值较对照组增加(P<0.01),与CNTF组比较,miR-7 mimic+CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值降低,miR-7 inhibitor+CNTF组GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-7 mimic转染明显减少野生型EGFR荧光素酶活性(P<0.01)。EGFR si RNA或S31-201预处理几乎完全逆转miR-7 inhibitor诱导的GFAP表达上调(P<0.01)。结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗CNTF诱导的大鼠星形胶质细胞活化。
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关 键 词: | 微小RNA-7 表皮生长因子受体 信号传导蛋白和转录激活物3 神经胶质原纤维酸性蛋白 星形胶质细胞 小干扰RNA |
miR-7 inhibits activation of astrocytes derived from rats via silencing of EGFR |
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Abstract: | |
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