TAM通过PLGF/Flt-1和TGF-β1通路促进非小细胞肺癌生长和肿瘤血管异生的研究

目的 探讨胎盘生长因子(PLGF)介导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肿瘤相关巨噬细胞(TAM)之间相互作用的具体机制。方法 采用尾静脉注射法将转染腺病毒(AAV)的NSCLC A549细胞注入10周龄的雄性NOD/SCID小鼠体内,构建小鼠肺癌动物模型。流式细胞技术检测瘤体内各种巨噬细胞(MΦ)亚型,RT-qPCR检测肿瘤细胞和TAM中PLGF、血管内皮生长因子受体(Flt-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平。根据A549细胞和MΦ细胞的培养条件不同,分为单纯A549组,单纯MΦ组,A549+MΦ组,A549+MΦ+sFlt-1组(加入10 μg/L sFlt-1),PLGF+MΦ组(加入100 ng PLGF)和PLGF+MΦ+sFlt-1组(加入100 ng PLGF和10 μg/L sFlt-1)。Transwell、MTT法分别检测不同共培养条件下A549细胞的增殖和迁移能力。根据HUVEC细胞的培养条件,分为对照组、条件培养基(CM)组、CM+SB431542组、TGF-β1组和TGF-β1+SB431542组,HUVEC细胞胶原凝胶测定法检测肿瘤血管异生情况。结果 与RFP-细胞相比,PLGF主要由肿瘤细胞表达(31.72±4.69 vs. 2.31±0.06,P＜0.001),而Flt-1主要由CD163+的巨噬细胞表达(P＜0.001)。A549+MΦ组A549细胞增殖能力显著强于单纯A549组和A549+MΦ+sFlt-1组(OD值:3.62±0.23 vs. 4.53±0.34 vs. 3.71±0.37,P＜0.05)。TAM/M2巨噬细胞中TGF-β1的表达量高于M1巨噬细胞(0.99±0.23 vs. 0.07±0.02,P＜0.05)。CM组和TGF-β1组中HUVEC细胞管状结构的形成最多(P＜0.05),TGF-β1抑制剂SB431542可抑制这一现象。结论 TAM和NSCLC细胞间通过PLGF/Flt-1和TGF-β1信号通路间的交互作用,促进NSCLC的生长和血管异生。