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| 增强型绿色荧光蛋白-神经标识真核表达载体构建及在细胞内的表达 | |
| 引用本文： | 乔录新,张玉林,丁渭,徐树莹,宋凤丽,张彤,吴昊,陈德喜. 增强型绿色荧光蛋白-神经标识真核表达载体构建及在细胞内的表达[J]. 中华神经医学杂志, 2013, 12(5): 439-443 |
| 作者姓名： | 乔录新 张玉林 丁渭 徐树莹 宋凤丽 张彤 吴昊 陈德喜 |
| 作者单位： | 1. 100069北京市肝病研究所;100069北京,首都医科大学附属北京佑安医院感染科 2. 首都医科大学附属北京佑安医院感染科,北京,100069 3. 100069北京市肝病研究所 |
| 摘 要： | 目的 构建可转染神经胶质细胞和神经元的增强型绿色荧光蛋白-神经标识(EGFP-ID)真核表达载体,为神经突起损伤活体研究提供技术方法. 方法 采用PCR方法分别从质粒pEGFP-N1载体和大鼠脑组织基因组DNA中扩增EGFP和ID序列.通过T4 DNA连接酶将纯化后的PCR产物EGFP与经过BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切的pcDNA4.1-hisB载体连接.将经克隆测序确定的pcDNA4.1-EGFP经由NotⅠ和Xba Ⅰ双酶切并与纯化的PCR产物ID连接,再次克隆测序确定为pcDNA4.1-EGFP-ID.将pcDNA4.1-EGFP与pcDNA4.1-EGFP-ID在转染试剂Fugene6 介导下转染人神经胶质瘤U87细胞和小鼠原代培养神经元,通过倒置荧光显微镜观察EGFP在2种细胞内的分布.此外,用50 μmol/L核苷类似物司他夫定处理神经元8d,第8天末观察EGFP-ID 示踪细胞突起发育情况,并与免疫荧光检测结果作比较. 结果 成功扩增得到EGFP和ID基因片段,重组得到EGFP-ID真核表达载体,该载体携带的EGFP基因在U87细胞和神经元内表达并布满细胞突起,示踪神经元突起形态变化的结果与免疫荧光观察结果一致. 结论 pcDNA4.1-EGFP-ID能够介导EGFP基因在神经元和胶质细胞突起内表达,从而直观再现神经突起形态特征. |
| 关 键 词： | 增强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 神经突起 神经标识 形态学 |
Construction of enhanced green fluorescent protein-neuronal identifier eukaryotic expression vector and its expression in both mouse cortical neurons and human glioblastoma cells in vivo |
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| Abstract: | |
| Keywords: | Enhanced green fluorescent protein Eukaryotic expression vector Neurite Neuronal identifier Morphology |
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