| hTfR报告基因慢病毒载体构建及其在神经干细胞的表达研究 |
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| 引用本文： | 郭永坤,张业森,刘春颖,戴宜武,黄瑾,姚慧,吴炳山,姚学勤,杨志军.hTfR报告基因慢病毒载体构建及其在神经干细胞的表达研究[J].中华神经医学杂志,2013,12(5):433-438. |
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| 作者姓名： | 郭永坤 张业森 刘春颖 戴宜武 黄瑾 姚慧 吴炳山 姚学勤 杨志军 |
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| 作者单位： | 1. 安徽医科大学北京军区总医院临床学院,合肥,230032
2. 北京军区总医院附属八一脑科医院,北京,100700 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(项目编号：30973225、81271316) |
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| 摘 要： | 目的 探讨人转铁蛋白受体(hTfR)基因慢病毒载体构建方法及其在神经干细胞(NSCs)中的表达情况,为NSCs的MR分子成像提供实验基础. 方法 利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增hTfR基因,并克隆到pLenti6.3载体,构建出慢病毒表达载体pLentiI6.3-hTfR-IRES-EGFP.利用Lipofectin2000试剂将PLP1、PLP2、PLP-VSVG和pLenti6.3-hTfR-IRES-EGFP共转染293T细胞进行慢病毒包装,48 h后收集病毒上清,体外感染NSCs.细胞流式筛选稳定表达hTfR的细胞,通过实时定量PCR和Western boltting检测hTfR的表达,细胞免疫荧光技术对过表达的hTfR进行亚细胞的定位. 结果 成功构建hTfR基因慢病毒表达载体,包装的慢病毒颗粒成功感染NSCs.实时定量PCR和Western boltting鉴定出hTfR在NSCs中过表达,hTfR基因表达相对值为2.275±0.281.细胞免疫荧光检测到过表达的hTfR主要在细胞膜上表达.NSCs分化后,hTfR在胶质细胞和神经元中稳定表达. 结论 本研究所用方法能成功构建hTfR慢病毒表达载体并筛选出稳定表达hTfR的NSCs系,为下一步活体内移植NSCs行MR分子成像实验研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 转铁蛋白受体 慢病毒载体 神经干细胞 增强型绿色荧光蛋白 |
Construction of human transferrin receptor gene's lentiviral vector and its expression in neural stem cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human transferrin receptor Lentiviral vector Neural stem cell Enhanced green fluorescence protein |
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