抗A型产气荚膜梭菌α毒素mAb V_H和V_L基因的克隆与序列测定

用提取的Ａ 型产气荚膜梭菌α毒素包涵体为免疫原， 制备了１ 株ｍＡｂ ２Ｅ３ 。其Ｉｇ 亚类为ＩｇＧ３， 细胞培养上清和腹水的ｍＡｂ 效价分别为１∶１０２４ 和１∶１０８ 。该ｍＡｂ ２Ｅ３ 可中和α毒素的磷脂酶Ｃ 活性和溶血活性， 对α毒素致死性腹腔攻击的小鼠具有良好的被动保护作用。另外， 应用ＲＴＰＣＲ 技术， 从杂交瘤细胞株２Ｅ３ 中， 扩增出ｍＡｂ ＶＨ 和ＶＬ基因， 分别克隆至载体ｐＧＥＭＴ中。序列分析证实， ＶＨ 基因为３５７ ｂｐ， 编码１１９ 个氨基酸；ＶＬ 基因为３２４ ｂｐ， 编码１０８ 个氨基酸。计算机分析表明，ＶＨ 和ＶＬ基因均为新发现的基因序列， 符合功能性重排的鼠抗体可变区基因的特征。ＶＨ 和ＶＬ 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（ Ｂ） 和轻链κⅢ家族。