| 反相高效液相色谱法测定人乳腺癌MCF7细胞中基因组DNA甲基化水平 |
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| 引用本文： | 蔡鑫泽,乔莹,都姝妍,刘楠,陈冬,车睿超,姜奕. 反相高效液相色谱法测定人乳腺癌MCF7细胞中基因组DNA甲基化水平[J]. 中国医科大学学报, 2010, 39(11) |
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| 作者姓名： | 蔡鑫泽 乔莹 都姝妍 刘楠 陈冬 车睿超 姜奕 |
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| 作者单位： | 中国医科大学附属第一医院中心实验室,沈阳,110001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 利用反相高效液相色谱法检测MCF7细胞系中基因组DNA的甲基化水平.方法 采用Nano LC(75 μm×15 cm,5 μm)和Micro LC(1.0 mm×15 cm,5 μm)的C18反相色谱柱,以甲醇-醋酸铵缓冲液(pH 5.0)为流动相,使用线性梯度程序,将MCF7细胞中基因组DNA水解产物进行分离,两种体系流速分别是300 nl/min和40μl/min,在273 nm波长处检测,利用外标法分别检测DNA中脱氧胞嘧啶(dC和甲基化脱氧胞嘧啶(5mdC)含量.结果 MCF7基因组DNA的水解产物,经反相色谱分离得到的峰图有较好的准确性与重复性;DNA水解后的产物为弱保留化合物,且Micro LC分离效果优于Nano LC;乳腺癌细胞MCF7甲基化水平为19.3%,高于正常细胞中基因组DNA甲基化水平.结论成功的将MCF7细胞中基因组DNA水解产物经反相色谱分离;使用Micro LC分离DNA水解后的弱保留产物较佳;MCF7细胞系基因组DNA甲基化水平高于正常细胞.
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| 关 键 词： | 反相高效液相色谱法 基因组 甲基化水平 乳腺癌 |
Genomic DNA Methylation in Human Breast Cancer Cell Line MCF7 Detected by Reversed-phase High Performance Liquid Chromatography |
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| CAI Xin-ze , QIAO Ying , DU Shu-yan , LIU Nan , CHEN Dong , CHE Rui-chao , JIANG Yi. Genomic DNA Methylation in Human Breast Cancer Cell Line MCF7 Detected by Reversed-phase High Performance Liquid Chromatography[J]. Journal of China Medical University, 2010, 39(11) |
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| Authors: | CAI Xin-ze QIAO Ying DU Shu-yan LIU Nan CHEN Dong CHE Rui-chao JIANG Yi |
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