| GST/HIF-1α(融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达 |
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| 引用本文： | 佟宇鑫,李丹妮,邵阳光,李妍,李丰.GST/HIF-1α(融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达[J].中国医科大学学报,2009,38(10). |
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| 作者姓名： | 佟宇鑫 李丹妮 邵阳光 李妍 李丰 |
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| 作者单位： | 1. 中国医科大学,第90期生物科学与生物技术系,卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳,110001
2. 中国医科大学,第94期临床医学系,卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳,110001
3. 中国医科大学,基础医学院细胞生物学教研室,卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳,110001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，中国博士后科研基金资助项目，辽宁省教育厅科学研究计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建GST/HIF-1α融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1-HIF-1α为模板,用PCR法扩增HIF-1α全长及各个截短片段,通过BamHI和Not I酶切位点将HIF-1α全长及各个截短突变体定向插入pGEx-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST/HIF-1α全长及各个截短突变体融合蛋白的表达.结论 成功构建了HIF-1α原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化HIF-1α蛋白和研究HIF-1α的生物学功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 缺氧诱导因子1α 截短突变体 质粒 原核表达 |
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