斑蝥素对血小板衍生生长因子BB诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的机制研究

目的探讨斑蝥素对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用及机制。方法组织块贴壁法获取原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscular cells,VSMC),运用VSMC表型标志蛋白抗体免疫荧光染色鉴定细胞,PDGF-BB诱导细胞增殖和迁移,并使用不同浓度斑蝥素加以处理。将实验分为,对照组(A组); PDGF-BB组(B组); PDGF-BB+5μmol/L斑蝥素组(C组); PDGF-BB+10μmol/L斑蝥素组(D组)。采用CCK-8细胞计数试剂盒检测细胞活性和增殖情况。细胞划痕实验检测细胞迁移水平。Western blot检测基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、总蛋白激酶B(t-Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及平滑肌细胞特异性蛋白(α-smooth muscle actin,α-SM-actin)表达水平。结果与DMSO处理的细胞比较,不同剂量(0.625、1. 25、2. 5、5和10μmol/L)斑蝥素处理的细胞活性无统计学差异(P> 0. 05)。与A组比较,B组细胞增殖活性和细胞迁移率显著提高[2. 46±0. 19 vs 1. 49±0. 12,(88. 79±0. 61)%vs (42. 63±3. 93)%,P <0. 05];与B组比较,C组、D组细胞增殖活性和细胞迁移率显著降低[0. 91±0. 07 vs 2. 46±0. 19,0. 61±0. 04 vs 2. 46±0. 19,(39. 90±4. 30)%vs (88. 79±0. 61)%,(20. 33±6. 13)%vs (88. 79±0. 61)%,P <0. 05]。Western blot结果显示,与A组比较,B组MMP-9、p-Akt的表达水平显著增加,α-SM-actin的表达水平显著降低(P <0. 05);与B组比较,C组、D组MMP-9、p-Akt的表达水平显著降低,α-SM-actin的表达水平显著增加,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论斑蝥素可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和迁移,其机制可能与下调p-Akt及MMP-9蛋白表达水平有关。

Mechanism of cantharidin underlying proliferation and migration of vascular smooth muscle cells induced by PDGF-BB

Qiu Liqiang;Xu Changwu;Li Wenjing;Jiang Hong;Wu Gang;Luo Qiang;Xia Hao(Department of Cardiology,Wuhan University People's Hospital,Wuhan 430060,Hubei Province,China)