金雀异黄素联合5-氟尿嘧啶抑制人结肠癌细胞株 SW480增殖的分子机制

目的：初步探讨金雀异黄素提高结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）的敏感性，促进结肠癌细胞凋亡的分子机制。方法选择 SW480结肠癌细胞株为实验对象，将金雀异黄素80μmol／L 和5-FU 30μg／mL 单用或联用48 h 作为药物实验组，另设不加药组为对照组。分别采用实时定量 PCR 和Western 印迹法检测各组细胞的生存素、Bcl-2、p21、caspase3和 caspase 9基因和蛋白表达情况。采用比较阈值法（2－ΔΔCT 法）来确定基因的相对表达量。以β-actin 作为内参照，进行半定量分析计算蛋白相对表达量。电泳迁移率改变分析（EMSA）检测各组细胞 NF-κB 的 DNA 结合活性。多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间两样本均数比较采用 LSD 检验。结果联合用药组的 caspase3、caspase9和p21基因表达（1．903±0．122、2．726±0．050、2．541±0．393）与蛋白表达（0．534±0．077、1．161±0．172、0．463±0．016）高于对照组（1．001±0．052、1．000±0．014、1．001±0．037和0．080±0．043、0．248±0．059、0．139±0．021）、金雀异黄素组（1．559±0．038、2．394±0．095、1．686±0．061和0．335±0．052、0．478±0．059、0．304±0．018）和5-FU 组（1．198±0．063、1．051±0．043、1．399±0．055和0．194±0．015、0．337±0．036、0．231±0．011），联合用药组的生存素基因与蛋白表达（0．165±0．018和0．216±0．014）低于对照组、金雀异黄素组和5-氟尿嘧啶单组（1．001±0．033、0．775±0．044、0．395±0．030和0．594±0．079、0．375±0．014、0．295±0．014），差异均有统计学意义（基因表达，F ＝802．865、52．760、39．992、187．288、37．435；蛋白表达，F ＝10．466、44．483、19．490、200．011、45．238；P 均＜0．01）， caspase3、p21在两单药组的表达与对照组相比，差异也有统计学意义（LSD 检验，P ＜0．05）。EMSA 检测显示，与对照组（1067．97±36．01）和5-FU 组（718．83±23．18）相比，金雀异黄素组（461．64±15．41）和联合用药组（585．28±7．82）的 NF-κB 蛋白 DNA 结合活性均有明显降低（LSD 检验，P ＜0．05）。结论金雀异黄素联合5-FU 协同促进结肠癌细胞凋亡，可能通过金雀异黄素抑制 NF-κB 的 DNA 结合活性，进一步上调 caspase3、caspase9、p21以及下调生存素起作用，提示金雀异黄素可能为结肠癌化学治疗提供辅助。

Investigation of the molecular mechanism how genistein combined with 5-fluorouracil inhibits proliferation of human colon cancer cell line SW480