| 人心肌营养素在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定 |
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| 引用本文： | 张正丰,廖维宏,杨青峰.人心肌营养素在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定[J].第三军医大学学报,2003,25(24):2189-2192. |
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| 作者姓名： | 张正丰 廖维宏 杨青峰 |
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| 作者单位： | 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 重庆市科委院士基金 ( 1999)~~ |
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| 摘 要： | 目的利用大肠杆菌高效表达可溶性具有生物学活性的重组huCT-1蛋白。方法采用PCR及T-A克隆将huCT-1开放阅读框基因克隆到pMD-18T载体上，再构建原核表达载体pGEX2T-huCT1。在不同温度不同时问，通过IPTG诱导pGEX2T—huCT1在DH5a大肠杆菌中表达，SDS-PAGE分析表达量和可溶性蛋白比例。GST亲和柱纯化huCT-1融合蛋白，凝血酶酶切融合蛋白并纯化。坐骨神经切断模型观察重组huCT-1对脊髓前角神经元的存活作用，结果构建了huCT-1的融合表达载体pGEX2T-huCT1。通过IPTG诱导，发现29℃诱导4h，目的蛋白表达量占全菌的1／5，可溶性蛋白与包涵体比为2／5。对其进行亲和柱纯化，GST/huCT-1融合蛋白纯度达到85％以上。融合蛋白酶切后，重组huCT-1蛋白纯度达到80％以上。发现原核表达重组huCT-1蛋白能挽救55％成年大鼠脊髓运动神经元的存活。结论成功地获取了具有生物活性的huCT-1的原核重组蛋白。
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| 关 键 词： | 心肌营养素-1 原核重组蛋白 生物活性 神经元 |
| 文章编号： | 1000-5404(2003)24-2189-04 |
| 修稿时间： | 2002年10月14 |
Expression and purification of human cardiotrophin-1 in E.coli and identification of its biological activity |
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| ZHANG Zheng feng,LIAO Wei hong,YANG Qing feng.Expression and purification of human cardiotrophin-1 in E.coli and identification of its biological activity[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2003,25(24):2189-2192. |
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| Authors: | ZHANG Zheng feng LIAO Wei hong YANG Qing feng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cardiotrophin 1 prokaryotic recombinant protein biological activity neuron |
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