| Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 谭龙益,陈洁,王皓,叶寒清,厉倩,顾继安,孔宪涛. Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国免疫学杂志, 2009, 25(5) |
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| 作者姓名： | 谭龙益 陈洁 王皓 叶寒清 厉倩 顾继安 孔宪涛 |
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| 作者单位： | 1. 上海市第一人民医院宝山分院医学检验科,上海,200840
2. 第二军医大学附属长征医院实验诊断科,上海,200003 |
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| 摘 要： | 目的:新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础.方法:RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因(1 206 bp),将其插入至原核表达载体pET-21、转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE鉴定.将纯化蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗血清.建立Western blot 鉴定重组蛋白和抗血清特异性,测定临床血清标本中Golph2蛋白水平.结果:从肝癌细胞中钓取的基因,出现2个碱基置换突变和1个碱基缺失突变,经回复突变,获得与NM 177937完全一致序列.SDS-PAGE和Western blot证实,重组Golph2蛋白质与预期结果一致.抗血清能够特异地识别52 kD重组蛋白质和73 kD血清蛋白质.结论:Golph2蛋白质表达和抗血清制备完全成功,可以用于后续研究
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| 关 键 词： | Golph2蛋白质 多克隆抗体 蛋白质表达 |
Prokaryotic expression of recombinant Golph2 protein and generation of its polyclonal antibody |
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| TAN Long-Yi,CHEN Jie,WANG Hao,YE Han-Qing,LI Qian,GU Ji-An,KONG Xian-Tao. Prokaryotic expression of recombinant Golph2 protein and generation of its polyclonal antibody[J]. Chinese Journal of Immunology, 2009, 25(5) |
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| Authors: | TAN Long-Yi CHEN Jie WANG Hao YE Han-Qing LI Qian GU Ji-An KONG Xian-Tao |
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