趋化因子CXCL-8趋化骨髓间充质干细胞迁移的体外效应

背景：早期研究表明趋化因子参与骨髓间充质干细胞的体外趋化，确定骨髓间充质干细胞体内迁移的分子机制，对其介导的细胞治疗中枢神经系统损伤和疾病有重要作用。目的：观察体外条件下趋化因子CXCL-8对大鼠骨髓间充质干细胞迁移的趋化作用。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-10/2008-06在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成。材料：纯种SPF级成年Wistar大鼠8只，由青岛市实验动物和动物实验中心提供。鼠重组趋化因子CXCL-8为Santa cruz公司产品。方法：采用全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，胰蛋白酶消化传代。取500 μL趋化因子CXCL-8，加入含体积分数为0.5%胎牛血清的DMEM条件培养基，分别将质量浓度调整为5，50，250，500 μg/L加到趋化板下层，对照组单纯添加DMEM条件培养基，以8 μm孔径的聚碳酸酯膜覆盖。调整骨髓间充质干细胞浓度至1.5×109 L-1，取100 μL细胞悬液加到趋化板上层。为验证趋化因子CXCL-8作用的特异性，将经抗CXCR6多克隆抗体孵育12 h后的骨髓间充质干细胞加到趋化板上层，趋化因子CXCL-8加到趋化板下层。主要观察指标：骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR1的表达，趋化因子CXCL-8对骨髓间充质干细胞体外趋化迁移作用及其特异性检测。结果：骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR1呈阳性表达，位于细胞膜和细胞浆中，RT-PCR琼脂糖凝胶电泳后出现215 bp特异性扩增条带。与对照组比较，加入5~500 μg/L趋化因子CXCL-8后，骨髓间充质干细胞迁移数均明显增加（P < 0.05）。加入抗CXCR1多克隆抗体后，骨髓间充质干细胞迁移数较250 μg/L趋化因子CXCL-8组明显减少（P < 0.05）。结论：体外条件下趋化因子CXCL-8在5~500 μg/L质量浓度范围可趋化骨髓间充质干细胞迁移，封闭趋化因子受体CXCR1后其趋化迁移作用明显减弱。

In vitro effects of chemotactic factor CXCL-8 on the migration of bone marrow mesenchymal stem cells