| UGRP1蛋白的表达、纯化、抗体制备及亚细胞定位 |
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| 引用本文： | 李圣贤,马勤耘,刘智,李雪松,宋怀东.UGRP1蛋白的表达、纯化、抗体制备及亚细胞定位[J].上海交通大学学报(医学版),2007,27(8). |
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| 作者姓名： | 李圣贤 马勤耘 刘智 李雪松 宋怀东 |
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| 作者单位： | 上海交通大学,医学院瑞金医院医学基因组学国家重点实验室,上海,200025 |
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| 摘 要： | 目的 子宫球蛋白相关蛋白1(UGRP1)是一种功能未知的分泌蛋白.通过表达、纯化蛋白、制备抗体及其在组织中表达的研究,为进一步研究其功能奠定基础.方法 从人胎肺组织中克隆得到UGRP1基因,构建重组表达质粒pGEX-5X-1/UGRP1.将此质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达含谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的GST-UGRP1融合蛋白.此融合蛋白经纯化分离后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体.用Western 印迹的方法检测多抗血清.通过构建含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的EGFP-N2-UGRP1载体,转染非洲绿猴肾细胞(COS细胞)表达重组蛋白,对UGRP1的表达进行亚细胞定位.结果 成功构建了pGEX-5X-1/UGRP1载体,获得了高纯度的重组蛋白和多克隆抗体.免疫组化分析表明UGRP1表达于肺支气管上皮细胞,亚细胞定位分析证实UGRP1主要表达于细胞浆.结论 研究发现UGRP1表达于肺支气管上皮细胞和在COS细胞的胞浆中表达.经纯化获得蛋白并制备抗体,为进一步研究UGRP1的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 子宫球蛋白相关蛋白1 GST融合蛋白 多克隆抗体 亚细胞定位 |
Cloning, expression and polyclonal antibody preparation of UGRP1 and its subcellular localization |
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| LI Sheng-xian,MA Qin-yun,LIU Zhi,LI Xue-song,SONG Huai-dong.Cloning, expression and polyclonal antibody preparation of UGRP1 and its subcellular localization[J].Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science,2007,27(8). |
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| Authors: | LI Sheng-xian MA Qin-yun LIU Zhi LI Xue-song SONG Huai-dong |
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