牛蛙核糖核酸酶的表达和鉴定及功能检测

目的：在大肠埃希菌中高效表达牛蛙核糖核酸酶（rana catesbeiana ribonuclease，RC-RNase），并对其纯化产物进行噻唑蓝（tetrazolium blue，MTT）实验，观察对肝癌细胞的抑制效果。方法：用异丙基硫代-D-半乳糖苷（isopropylthio-D-galactoride，IPTG）诱导原核表达质粒PET32a—RC-RNase在大肠埃希菌F．cali B121（DE3）plysS中表达。茴体经超声、离心后，用Ni—NTA Agarose亲和层析法对包涵体进行纯化。采用MTT法检测纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞的杀伤活性。结果：纯化的目的蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium doecyls ulphatepolyacrylamide gel eletrophoresis，SDSPAGE）蛋白电泳表明，RC-RNase在大肠埃希菌中是以包涵体的形式表迭。用MXT法的结果中可以看出，纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞具有一定的抑制效果，其IC50值（半抑制浓度）是22．44μg／mL，。结论：牛蛙核糖核酸酶在大肠埃希菌中得到大量表达，为进一步研究其生物学特性以及功能打下了良好的基础。

Expression, indentification and functional characterization of RC-RNase