重组截短型TGF-βⅡ型受体真核载体的构建

目的构建截短型TGF-βⅡ型受体(tTβRⅡ)真核表达载体,为体外获得有活性的tTβRⅡ重组蛋白奠定基础。方法以实验室保存的含有人源tTβRⅡ基因的质粒为模板PCR扩增tTβRⅡ目的基因,利用定向克隆到毕氏酵母表达载体p PICZαA中,测序正确后,p PICZαA-t TβRⅡ载体经SaⅠ酶切线形化,以电转化法导入X-33毕氏酵母菌株中,经YPD平板Zeocin抗性筛选,通过PCR鉴定阳性菌株。结果真核表达载体pPICZαA-tTβRⅡ经酶切鉴定构建正确,测序结果显示未发生基因突变。结论成功构建pPICZαA-tTβRⅡ毕氏酵母表达载体。