四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较 |
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引用本文: | 孙强明,戴长柏,李亮助,谢天宏,孙雯佳,孙茂盛,徐维明. 四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2004, 24(2): 128-133 |
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作者姓名: | 孙强明 戴长柏 李亮助 谢天宏 孙雯佳 孙茂盛 徐维明 |
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作者单位: | 650118,昆明,中国医学科学院,中国协和医科大学医学生物学研究所分子生物学研究室 |
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基金项目: | 云南省自然科学基金 (青年基金 )资助项目( 2 0 0 1C0 0 3 1Q) |
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摘 要: | 目的 构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF/IL-6融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒,4种融合蛋白分别是GM-CSF(9~127)-IL-6(29~184)(简称GII)、GM-CSF(9~127)-IL-6(1~184)(简称GL2)、GM-CSF(1-127)-IL-6(1—184)(简称GI3)、GM-CSF(9-127)-IL-6(24~184)(简称GI4),表达质粒分别导入E.coli BL-21中诱导表达。通过Q Sepharose HP离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用hGM—CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性。结果 对4种融合蛋白基因的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli BL-21中均得到高效表达,表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过Q Sepharose HP离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白,其纯度均达到95%以上。活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF/IL-6融合蛋白。
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关 键 词: | 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素-6 融合蛋白 克隆 基因表达 |
修稿时间: | 2003-05-29 |
Gene construction, expression and biologic activities of four rhGM-CSF/IL-6 fusion proteins |
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Abstract: | |
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Keywords: | GM-CSF IL-6 Fusion protein Cloning Gene expression |
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