三氯化铁-聚偏氟乙烯膜滤器富集噬菌体方法的建立和评价题录

目的建立和评价基于三氯化铁-聚偏氟乙烯(FeCl3-PVDF)膜滤器富集自然水体中噬菌体的方法。方法基于絮凝浓缩原理, 利用铁离子絮凝结合膜过滤器建立从水样中回收噬菌体的方法。利用琼脂双层法测定噬菌体滴度、噬菌体荧光染色观察和实时荧光PCR反应等方法检测噬菌体的回收效率。采集不同来源的水体标本进行模拟实验评价富集效果, 同时以医院排出污水作为实际水样, 利用临床常见的耐药菌作为宿主指示菌, 进一步分析FeCl3-PVDF膜滤器富集方法对自然实际水样中噬菌体的富集效果。结果建立了铁离子浓度50 mg/L, 采用PVDF膜滤器富集自然水体中噬菌体的方法。该方法对噬菌体的回收率为93%～100%;在多功能显微镜下观察发现富集后水样的噬菌体明显增多, 酶标仪测定富集后水样荧光值约为富集前的13倍;对医院外排水实际水样浓缩处理后, 浓缩组和未浓缩组噬菌体的分离阳性率分别为23%和4%, 浓缩组荧光值为未浓缩组的2～24倍。结论 FeCl3-PVDF膜滤器方法可简便、高效快速地富集不同水体样本中噬菌体。