| 小鼠γ-干扰素真核表达质粒的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 胡晓文,李建国.小鼠γ-干扰素真核表达质粒的构建和鉴定[J].中华生物医学工程杂志,2003,9(6). |
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| 作者姓名： | 胡晓文 李建国 |
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| 作者单位： | 中山大学附属第二医院呼吸内科,广州,510120 |
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| 摘 要： | 目的克隆小鼠γ-干扰素(γ-IFN)基因,构建并鉴定小鼠γ-干扰素真核表达质粒.方法从BALB/c小鼠脾脏提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出小鼠γ-干扰素基因, 分别用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切扩增片段和pcDNA3.1(-),定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(-),构建成真核表达质粒pcDNA3.1(-)γ-IFN.转化产物通过PCR扩增筛选,双酶切鉴定;阳性克隆进行序列分析.结果 RT-PCR产物电泳可见一约500bp大小目的片段.PCR和双酶切电泳结果均证实已插入约500bp的γ-IFN基因片段;阳性克隆测序结果表明克隆的小鼠γ-干扰素基因完全正确.结论成功构建了小鼠γ-干扰素真核表达质粒,为进一步气道内实施哮喘小鼠基因治疗打下了坚实基础.
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| 关 键 词： | γ-干扰素 真核表达质粒 定向克隆 序列分析 |
Construction and Identification of Mouse Gamma Interferon Gene Eukarotic Expressing Plasmid |
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