| 组织因子途径抑制物-2基因原核表达及其重组蛋白生物活性研究 |
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| 引用本文： | 宁勇,黄瑞滨,宋善俊. 组织因子途径抑制物-2基因原核表达及其重组蛋白生物活性研究[J]. 中华检验医学杂志, 2005, 28(11): 1146-1150 |
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| 作者姓名： | 宁勇 黄瑞滨 宋善俊 |
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| 作者单位： | 1. 430064,武汉,湖北中医学院医学检验与技术系
2. 华中科技大学血液病研究所 |
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| 基金项目： | 湖北省自然科学基金资助项目（2005ABA069） |
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| 摘 要： | 目的构建人组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因的原核表达载体并在大肠杆菌中有效表达；探索重组TFPI-2抑制纤溶酶活性及其对人卵巢癌细胞（A2780）迁徙浸润能力的影响。方法1．以TFPI-2cDNA为模板，PCR扩增得到645bpDNA片段，克隆入表达载体pET28a，并转化大肠杆菌B121株表达。2．限制性内切酶和菌落PCR法鉴定TFPI-2基因DNA片段，Western blot法鉴定TFPI-2融合蛋白。3．建立TFPI-2抑制纤溶酶的动力学方法并测定重组TFPI-2对纤溶酶的抑制作用。4．在体外用Boyden小室，以不同浓度TFPI-2作用A2780细胞进行迁徙和浸润实验。结果1．成功构建重组TFPI-2的原核表达载体pET28a并在B121株中表达、纯化，获得大量TFPI-2蛋白。2．Western blot证实表达的融合蛋白为TFPI-2。3．重组TFPI-2对液相和固相中的纤溶酶具有显著抑制作用，且呈剂量-效应关系。4．在迁徙实验中，将A2780．TFPI-2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较，经t检验，无统计学意义（P〉0．05）；在浸润实验中，将A2780-TFPI-2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较及TFPI-2不同浓度组间的细胞数进行比较，经t检验，具有显著差异（P〈0．01）。结论1．人TTPI-2基因的表达，为TFPI-2病理生理的作用和临床研究提供了丰富材料。2．重组TFPI-2抑制纤溶酶活性的研究，为探讨TFPI-2对人卵巢癌细胞浸润转移能力的影响等提供了实验依据。3．重组TFPI-2对人卵巢癌细胞体外自身运动能力无影响，但可显著抑制人卵巢癌细胞的体外浸润能力，为将来卵巢癌用蛋白酶抑制剂治疗提供一可能的靶向依据。
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| 关 键 词： | 组织因子途径抑制物-2 卵巢肿瘤 基因表达 |
| 收稿时间： | 2005-06-13 |
| 修稿时间： | 2005-06-13 |
Study on prokaryotic expression and partial biological activities for tissue factor pathway inhibitor-2 |
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| NING Yong,HUANG Rui-bin,SONG Shan-jun. Study on prokaryotic expression and partial biological activities for tissue factor pathway inhibitor-2[J]. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 2005, 28(11): 1146-1150 |
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| Authors: | NING Yong HUANG Rui-bin SONG Shan-jun |
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| Affiliation: | Department of Laboratory Medicine and Technology, Hubei College of Traditional Chinese Medicine, Wuhan 430064, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tissue factor pathway inhibitor-2 Ovarian Neoplasms Gene Expression |
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