| 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1的反式调节基因筛选 |
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| 引用本文： | 张连峰,李继昌,韩莉,成军,陈立东.丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1的反式调节基因筛选[J].郑州大学学报(医学版),2007,42(4):638-641. |
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| 作者姓名： | 张连峰 李继昌 韩莉 成军 陈立东 |
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| 作者单位： | 1. 郑州大学第一附属医院消化内科,郑州,450052
2. 北京地坛医院传染病研究所,北京,100011 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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军队科技攻关基金
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解放军留学回国人员科研启动基金
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军队科技攻关项目
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军队科技攻关基金 |
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| 摘 要： | 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1反式激活的相关基因,从分子生物学的角度研究HCV致病机制。方法:以NS5ATP1表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ATP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照组,从中分别提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及生物信息学分析。结果:成功构建NS5ATP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后将阳性克隆经菌落PCR分析,得到90个200～1000bp的插入片断。挑选含插入片段的30个克隆进行测序,通过生物信息学分析得到3种已知序列的基因(Ras癌基因家族成员RAN、DNA依赖的RNA聚合酶Ⅱ多肽C、核糖体蛋白L2)和1个未知功能的序列(推测为新基因)。结论:筛选得到的cDNA基因全长序列包括一些与...
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| 关 键 词： | 抑制性消减杂交 丙型肝炎病毒 NS5ATP1基因 反式调节 |
| 修稿时间： | 2007年3月19日 |
Screening of target genes transactivated by human gene 1 transactivated by HCV NS5A protein |
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| ZHANG Lianfeng,LI Jichang,HAN Li,CHENG Jun,CHEN Lidong.Screening of target genes transactivated by human gene 1 transactivated by HCV NS5A protein[J].Journal of Zhengzhou University: Med Sci,2007,42(4):638-641. |
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| Authors: | ZHANG Lianfeng LI Jichang HAN Li CHENG Jun CHEN Lidong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | suppression subtractive hybridization HCV NS5ATP1 gene transactivation |
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